低溫離心機(jī)提取RNA酶的注意事項(xiàng)

發(fā)布時(shí)間：

2014-02-12

概要：

實(shí)驗(yàn)室應(yīng)專門辟出RNA操作區(qū)，盧湘儀低溫離心機(jī)，移液器，試劑等均應(yīng)專用。RNA操作區(qū)應(yīng)保持清潔，并定期行除菌。

RNA酶無(wú)處不在，在實(shí)驗(yàn)操作的任何一步，任何偶然的疏忽或不妥當(dāng)?shù)牟僮鞫加锌赡茉斐蒖NA酶的污染，從而導(dǎo)致整個(gè)實(shí)驗(yàn)的失敗。因此，嚴(yán)格控制實(shí)驗(yàn)條件，避免任何可能的污染，是保證實(shí)驗(yàn)成功的關(guān)鍵。為此，必須作到以下幾點(diǎn)：

1.如果可能，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)專門辟出RNA操作區(qū)，盧湘儀低溫離心機(jī)，移液器，試劑等均應(yīng)專用。RNA操作區(qū)應(yīng)保持清潔，并定期行除菌。

2.如果可能，在超凈臺(tái)中按照細(xì)胞培養(yǎng)的要求進(jìn)行操作，可以有效避免操作中引起的RNA酶污染。

3.操作過(guò)程中應(yīng)始終戴一次性橡膠手套，并經(jīng)常更換，以防止手、臂上的細(xì)菌和真菌以及人體自身分泌的RNA酶帶到試管或污染用具，盡避免使用一次性塑料手套。塑料手套不但常常造成操作不便，且塑料手套的多出部分常常在器具的RNase污染處和RNase-free處傳遞RNase，擴(kuò)大污染。

4.避免在操作中說(shuō)話聊天。也可以戴口罩以防止引起RNA酶污染。

5.盡量使用一次性的塑料制品，盡量避免共用器具如濾紙，tips，tubes等，以防交叉污染。例如，從事RNA探針工作的研究者經(jīng)常使用RNase H，T1等，在操作過(guò)程中極有可能造成移液器、離心機(jī)等的污染。而這些污染了的器具是RNA操作的大敵。

6. 關(guān)于一次性塑料制品，建議使用廠家供應(yīng)的出廠前已經(jīng)滅菌的tips和tubes等。多數(shù)廠家供應(yīng)的無(wú)菌塑料制品很少有RNA酶污染，買來(lái)后可直接用于RNA操作。許多研究者用DEPC等處理的塑料制品，往往由于二次污染而帶有RNA酶，從而導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)失敗。

7.配制溶液用的酒精、異丙醇、Tris等應(yīng)采用未開封的新瓶。

8.所有舊塑料制品都必須用0.5M的NaOH處理10分鐘，用雙蒸水徹底沖洗，DEPC-H20浸泡過(guò)夜后滅菌。

9.無(wú)法用DEPC處理的用具可用氯仿擦拭若干次，這樣通常可以消除RNA酶的活性。但氯仿會(huì)溶解某些塑料制品，應(yīng)當(dāng)注意。

10.RNase AwayTM試劑可以替代DEPC，操作簡(jiǎn)單，價(jià)格低，且無(wú)毒性。只需將RNase AwayTM直接倒在玻璃器皿和塑料器皿的表面，浸泡后用水沖洗去除，即可以快速去除器皿表面的RNase，并且不會(huì)殘留而干擾后繼實(shí)驗(yàn)。

11.如果您需要遠(yuǎn)距離運(yùn)輸或長(zhǎng)期儲(chǔ)藏RNA樣品，建議先將標(biāo)本（細(xì)胞、組織）保存在RNA保存液（RNAwait、RNAlater）中，使細(xì)胞內(nèi)的RNA與RNA酶分離，在室溫可以保存7天，4℃可以保存4周，-20℃、-80℃可以長(zhǎng)期存檔保存標(biāo)本，RNA質(zhì)量不受影響，用各類方法抽提仍可以獲得高質(zhì)量的RNA。

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